外泌体提取方法

外泌体的几种提取方法:


1. 超速离心法

超速离心是目前的外泌体领域的分离“金标准”。超速离心的原理和洗衣机脱水相同——都利用了离心运动。不过超速离心技术作用可比洗衣机大得多:细菌和细胞的分离,病毒的纯化和分离,蛋白质、DNA、RNA等大分子以及细胞线粒体等亚细胞的分离都不在其话下。超速离心稳稳抓住物质分离的关键——找差异。当分离物质的沉降系数“S”差异大(沉降系数“S”大小取决于物质的形状、大小、质量等。不同的“S”意味着不同的沉降速度,离心时“S”大的物质先沉底。),可以用差速离心;如果沉降系数“S”差别不太大(小于一个数量级),就选择密度梯度离心。

 

2.超滤离心法

由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质,利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体。超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。

 

3.磁珠免疫捕获法

外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以广泛普及。

 

4. 凝胶色谱法:

凝胶色谱法是先将培养基上清通过滤膜去除大分子蛋白质,然后将滤液通过排阻色谱,大分子物质会被洗脱下来,最后得到外泌体。此方法操作费时,过程较为复杂。

 

分离之后,可以通过外泌体的物理特征进行甄别,外泌体直径在40-100nm之间,因此可通过电子显微镜等方法进行直接地观察。其次,间充质干细胞外泌体有自己的表面标志物如CD81、CD9等,这些可以通过微流式细胞分析仪、免疫印迹分析、酶联免疫吸附试验进行分析鉴定。

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