目前,细胞存储的冻存技术成熟,冻存的基本流程是将外周血里面的红细胞、血小板等去除,将其中的单个核细胞(PBMC)分离出来冻存。
我们冻存的细胞可以在未来用于各种不同的过继性免疫细胞治疗。当前的技术体系可以使复苏细胞活率达到90%以上,并且可以让种子细胞的状态得到重新启动,进而使其扩增能力优于未经冻存的细胞。
现行的细胞冷冻保存技术通过将细胞悬浮在加有冷冻保护剂的细胞冻存液中,以安全的降温速度降至-150℃以下,使细胞进入休眠状态,并在此温度下进行长期保存。
细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少冷冻过程中胞内水分子形成大的冰晶。目前,细胞冻存最常用的技术是程序降温法,主要通过添加适量保护剂,以缓慢冷冻的方法来将冻存细胞降温到目标温度,长期保存。
采用甘油或二甲基亚砜等物质作为保护剂,是因为这些物质分子量小、溶解度大、易穿透细胞,可以使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性,且对细胞无明显毒性。降低降温的速度可以减慢冰晶生长的速度,减小结晶过程对细胞的伤害。
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